Ultrasonisk homogenisator

Ofte stillede spørgsmål om brudte celler http://www.scientzbio.com/

Hvad er betingelserne for sonication af Streptomyces (actinomycetes)?

Analytisk: actinomycetes tilhører den (G + C) molære procentdel (mol%) af Gram-positive (Eubacteria) forgreningsgruppen på det phylogenetiske træ i det prokaryote system, som har de molekylære og biologiske egenskaber unikke for prokaryoter. Imidlertid varierer den kemiske sammensætning af cellevæggen i sine forskellige grupper meget.

I E. coli-ultralydet anvendes 400W, og metoden til at bryde 5'erne i 5'erne er effektiv, men den anvendes på Streptomyces, og den har ingen virkning på grund af forskellen i cellevægssammensætning. Den forudgående spinning af Streptomyces (actinomycetes) er generelt konfigureret til en vis koncentration af bakteriesuspension. De specifikke betingelser for knusningen ved anvendelse af ultralydcelleforstyrrelsen er: at samle bakterierne i 24 timers kulturopløsning ved 5 000 r / min i 5 minutter for at samle cellerne; vaskes med en pH 7,5 Na2HPO-NaH2PO-buffer 3 gange, og derefter formuleres cellerne i en 1: 3 bakteriesuspension under anvendelse af bufferen. Placeret i et 40 ml stort plastrør anbring det store plastrør i et isbad og knus det med en ultralydcelleforstyrrelser (strøm 200W, 1/2 "probe, knuse i 30'erne, intermitterende 30'erne), knusningsopløsning ved 12.000 r / min Centrifuge ved høj hastighed i 30 min, samler celleaffald og supernatant. Vaskceller kan også vaskes en gang med forkølet saltopløsning eller Tris-HCI ved pH 8. Desuden varierer ultralydsdosis kraftigt med mængden af prøve og bakterier. Strømmen kan være 400- 600w, knust i 5s, stoppet i 5s, isbad og den endelige koncentration af 1 mM PMSF tilsættes. For at bestemme den passende ultralydsintensitet og -frekvens er det nødvendigt at kontrollere, om bakterierne er fuldstændigt brudte til enhver tid.