Sådan bruger du en genpistol

1. Materialepræparation

Et tyndt lag medium blev anbragt på en kulturskål på 9 cm2, og materialet (normalt umodne embryoner, modne embryoner, små callus, suspensionsceller, protoplaster osv.) Blev udpladet i midten af parabolen med en diameter på 3 cm .

2, behandling af guldpulver

Tag 60mg guldpulver eller wolframpulver i et centrifugerør, tilsæt 1ml absolut ethanol, ryst godt i 3 minutter, centrifuger for 1rain ved 9615g, fjern supernatanten, tilsæt 1ml sterilt vand og bland godt, centrifuger ved 9615g, gentag trin 3 ovenfor. Times. Endelig blev guldpulveret suspenderet i 1 ml sterilt destilleret vand og opbevaret ved 4 ° C eller ved stuetemperatur.

3, DNA-behandling

Tag 50tA guldpulver suspension, tilføj 5rd plasmid DNA (1,0 / lg ~ 1) opløsning, 50 // l

0,1 mol / l spermidin (den anvendte opløsning blev sterilsteriliseret), rystet i 3 minutter, efterladt ved stuetemperatur i 10 minutter, centrifugeret ved 9615 g i 10 s, kasseret supernatanten; Tilsæt 250 ~ 1 absolut ethanol, ryst til centrifuge ved 9615 g i 10 s og kassér supernatanten. Pelleten blev resuspenderet i 60/1 1 absolut ethanol og anvendt til 5 skud (10 til 1 pr. Skud).

4, operationen af genpistolen

Alle operationer af genpistolen udføres under aseptiske betingelser som følger:

1) Desinficere overfladen af genpistolen og prøvekammeret med 70% ethanol. Samtidig blev barrierenettet og den spaltbare skive, den mikroelastiske bærer, holderen og fastgørelsesværktøjet gennemblødt i 15 minutter med 70% ethanol og derefter anbragt på en ren bænk for at tørre. Den spaltbare membran, det faste dæk og den mikroelastiske bærerstartningsindretning kan overfladesteriliseres med 70% ethanol og blåses tørt.

2) Sæt mikropartikelglaset ind i fastholdelsesringen, og tilsæt en blanding af DNA og guldpulver til midten af mikropartikelglaset og tør det i ca. 1 min.

3) Installer den brudbare membran på holderen og drej den med uret på gasacceleratoren.

4) Monter rumringen, blokeringsnetet, den blokerende netholder, partikelholderen og fastgørelsesringen (ansigt med partiklerne nedad), stram dækslet og sæt det i grebet.

5) Placer prøven i bombardementskammeret og luk døren.

6) Åbn heliumcylinderens hovedventil og drej heliumregulatorventilen med uret, så indikatoren for trykmålerens peger er højere end membrantrykket 200Psi (= 1,379MPa).

7) Tænd for gen pistol og transformer switch.

8) Tryk på vakuumknappen. Når vakuumet er 26-28in Hg (= 88.05 ~ 94.82kPa), skal du trykke hurtigt på Hold-knappen og derefter trykke på låseknappen og holde den nede, indtil den er aktiveret.

9) Tryk på udluftningsknappen for at nulstille prøven, når vakuumtabellen er nulstillet.

10) Luk ned.

Tilspænd heliumcylinderens hovedafbryder, tryk en tom pistol, returner trykmålerens peger til nul, og drej derefter trykreguleringsventilen mod uret; Sluk hovedafbryderen til genpistolen og transformatoromskifteren.