Almindelige problemer, når ultralyd homogenisator bryder Escherichia coli

E. coli udtrykker fremmed protein. Når det sonikeres, suspenderes det i PBS, der indeholder 1% triton-X-100. Ultralydseffekten er bedre. Effekten af 1% triton-X-100 er stadig indlysende. Værker, såsom Streptomyces.

Bakterieudfældning tilsæt direkte prøve 1buffer, tilsæt 5 ml mercaptoethanol, bland, centrifuge, kog i 10 minutter, direkte belastning, farvning og dekoleringstrin er som følger: læg limen i den passende mængde farvningsvæske i mikrobølgeovnen i 1 min, farvningen opløsningen erstattes med en stor mængde Vandet kan koges i mikrobølgeovnen i 10 minutter.

Efter ekspression af det rekombinante protein blev cellerne forstyrret ved ultralydbølge ved anvendelse af et isbad, 400W og 2S stoppet for 1S, men en stor mængde skum blev genereret på kort tid hvilket påvirker knusningseffektiviteten. Både pbs og tris buffere var de samme, og til sidst var knusningen ufuldstændig. Men mit målprotein er i disse ubrudte celler, hvilket gør mig ude af stand til at få eksperimentelle resultater.

Lad mig give dig en analyse af hvorfor denne situation og løsning.

1. Bobler vil blive genereret, fordi din sondposition ikke er placeret godt, sonden skal være tæt på bunden, ca. 1 cm (jeg er normalt 0,5 cm fra bunden), instrumentet har forskellige strømniveauer, men du kan observere side, der er udsving, men vær ikke for aggressiv.

2. Super 3S stopper 10S, ultralyd omkring 20 gange for at se effekten

3. Vær opmærksom på hornets position. Hvis du ikke er korrekt, skal du justere det i tide. Ud fra perspektivet af koncentrationen af bakterier forsøger du at øge lydstyrken ved knusning, og styrken bør ikke overstige 60%.

4. Prøv 8S for Super 8S. For nogle bakterielle proteiner er din metode vanskelig at sprede varme, hvilket resulterer i protein denaturering og boblegenerering. Det er bedst at holde pause lidt længere. Dette er mere almindeligt i form af inklusionsorganer.